PCR即聚合酶鏈式反應,是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,也是生物學、醫(yī)學臨床等領(lǐng)域廣泛應用的實驗技術(shù)。其特點是能將微量的 DNA 大幅增加。實驗室分為四個區(qū)域,進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時,不得將工作服帶出,四區(qū)域分別為:
1.試劑配制區(qū)
2.樣品處理區(qū)
3.核酸擴增區(qū)
4.產(chǎn)物分析區(qū)
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PCR 實驗室可以是分散形式,也可以是組合形式。完成一組 PCR 實驗,通常應經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個實驗過程,若實驗工藝需要,還應增加樣品粉碎過程。
一、分散形式 PCR 實驗室
所謂分散形式 PCR 實驗室,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式。對于這種布置形式的 PCR 實驗室,由于各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。
本文標簽:設(shè)計規(guī)范
二、組合形式 PCR 實驗室
所謂組合形式 PCR 實驗室, 是指完成 PCR 四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式 PCR 實驗室,由于各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間,以減少室內(nèi)外空氣交換。試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染;核酸擴增室及產(chǎn)物分析室應呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品。
如果使用熒光 PCR 儀,擴增室和產(chǎn)物分析室可以合并。
若房間進深允許,可設(shè) PCR 內(nèi)部專用走廊。需要指出的是在減少室內(nèi)外空氣交換方面,緩沖間比專用走廊更有意義。
各個區(qū)域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。
PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。需要嚴格的通風設(shè)計,若通風設(shè)計不合理,會使風速流向混亂,甚至危害人們健康。
進入實驗室區(qū)域工作人員應該按照以下路徑:
公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實驗區(qū)
工作人員退出實驗室的路徑為:
污染試驗區(qū)——緩沖間——淋浴間(有條件的可設(shè)置)——更衣間——公共清潔區(qū)
標準的PCR實驗室設(shè)計規(guī)范
1、主體結(jié)構(gòu)
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金 50 內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
2、標準的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)
將 PCR 過程分成試劑準備、標本制備和 PCR 擴增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū), 同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個 PCR 實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
可打開緩沖區(qū)Ⅰ,緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣,在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口,空氣通過回風口向室內(nèi)換氣。
3、消毒
在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū) 還設(shè)置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面建議使用 PVC 卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少 800mm×800mm)接縫需要小于 2mm。
6、照明
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
在建設(shè)的過程中應注意:
●規(guī)范的安裝流程和全面的服務流程。
●嚴格按照規(guī)范科學設(shè)計的安裝流程。
●安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進線位置,電話網(wǎng)絡線進線位置,進水水壓,最小安裝空間,地面平整度,通風孔、進水管和下水管的位置等,理想狀態(tài)的空間尺寸和通風口尺寸。
●實驗室的墻體,包括頂棚,應結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好;所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。